Teknologi peptida FRET

Transfer energi resonansi fluoresensi (FRET)

Transfer energi resonansi fluoresensi (FRET) adalah proses transfer energi non-radiasi di mana energi keadaan tereksitasi donor ditransfer ke keadaan tereksitasi akseptor melalui interaksi pasangan listrik antarmolekul.Proses ini tidak melibatkan foton dan karenanya non-radiasi.Pengujian ini memiliki kelebihan yaitu cepat, sensitif, dan sederhana.

Pewarna yang digunakan dalam uji FRET bisa sama.Namun pada sebagian besar aplikasi, sebenarnya pewarna yang digunakan berbeda.Singkatnya, perpindahan energi resonansi cahaya adalah perpindahan sepasang dipol dari donor (pewarna 1) ke akseptor (pewarna 2) ketika gugus donor tereksitasi.Secara umum, spektrum emisi gugus fluorofor Donor tumpang tindih dengan spektrum serapan gugus Akseptor.“Jika jarak antara kedua fluorofor sesuai (10-100 A), perpindahan energi fluorofor dari donor ke akseptor dapat diamati.”Metode transfer energi bergantung pada struktur kimia reseptor:

1. Diubah menjadi getaran molekul, yaitu cahaya bercahaya transfer energi menghilang.(Reseptor adalah pemadam cahaya)

2. Emisinya lebih kuat daripada reseptornya sendiri, sehingga mengakibatkan pergeseran merah pada spektrum fluoresensi sekunder.”(Reseptor adalah pemancar cahaya).

Kelompok donor (EDANS) dan gen akseptor (DABCYL) terikat secara seragam dengan substrat alami protease HIV, dan jika substrat tersebut tidak diputuskan, DABCYL dapat mematikan EDANS dan kemudian menjadi tidak terdeteksi oleh fluor.Setelah pemutusan protease HIV-1, EDANS tidak lagi dipadamkan oleh DABCYL, dan luciferase EDANS selanjutnya dapat dideteksi.Ketersediaan protease inhibitor dapat dipantau dengan perubahan intensitas fluoresensi EDANS.

Peptida FRET adalah alat yang mudah digunakan untuk mempelajari nonspesifisitas peptidase.Karena proses reaksinya dapat terus dipantau, ini menyediakan metode yang mudah untuk mendeteksi aktivitas enzim.Kemilau yang dihasilkan setelah hidrolisis ikatan peptida oleh donor/akseptor memberikan ukuran aktivitas enzim pada konsentrasi nanomolar.Ketika peptida FRET utuh, ia menunjukkan hilangnya kilatan internal secara tiba-tiba, namun ketika ikatan peptida apa pun yang berlawanan dengan donor/akseptor putus, ia melepaskan kilatan, yang dapat dideteksi secara terus-menerus dan aktivitas enzim kemudian dapat diukur.