Transfer Energi Resonansi Fluoresensi (FRET)
Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) adalah proses transfer energi non-radiatif di mana energi keadaan tereksitasi donor ditransfer ke keadaan tereksitasi akseptor melalui interaksi pasangan listrik antarmolekul. Proses ini tidak melibatkan foton dan karenanya non-radiatif. Pengujian ini memiliki keuntungan menjadi cepat, sensitif dan sederhana.
Pewarna yang digunakan dalam uji FRET bisa identik. Tetapi dalam sebagian besar aplikasi, pewarna yang berbeda sebenarnya digunakan. Singkatnya, transfer energi resonansi bercahaya adalah transfer sepasang dipol dari donor (pewarna 1) ke akseptor (pewarna 2) ketika kelompok donor bersemangat. Secara umum, spektrum emisi kelompok fluorofor donor tumpang tindih dengan spektrum serapan dari kelompok akseptor. "Ketika jarak antara dua fluorofor sesuai (10 - 100 A), transfer energi fluorofor dari donor ke akseptor dapat diamati." Metode transfer energi tergantung pada struktur kimia reseptor:
1. Diubah menjadi getaran molekuler, yaitu, cahaya bercahaya transfer energi menghilang. (Reseptor adalah quencher ringan)
2. Emisi lebih intens daripada reseptor itu sendiri, menghasilkan pergeseran merah dalam spektrum fluoresensi sekunder. ” (Reseptor adalah emitor bercahaya).
Grup donor (edans) dan gen akseptor (dabcyl) secara seragam terkait dengan substrat alami HIV protease, dan ketika substrat tidak terputus, dabcyl dapat quenle edans dan kemudian menjadi tidak terdeteksi untuk fluor. Setelah pemutusan protease HIV-1, Edans tidak lagi dipadamkan oleh dabcyl, dan edans luciferases selanjutnya dapat dideteksi. Ketersediaan protease inhibitor dapat dipantau dengan perubahan intensitas fluoresensi edans.
Peptida fret adalah alat yang nyaman untuk mempelajari nonspesifik peptidase. Karena proses reaksinya dapat dipantau secara terus menerus, ia menyediakan metode yang nyaman untuk mendeteksi aktivitas enzim. Kejatuhan yang diproduksi setelah hidrolisis ikatan peptida oleh donor/akseptor memberikan ukuran aktivitas enzim pada konsentrasi nanomolar. Ketika peptida fret masih utuh, itu menunjukkan penghilangan flash internal yang tiba -tiba, tetapi ketika ikatan peptida yang berlawanan, donor/akseptor pecah, ia melepaskan flash, yang dapat dideteksi secara terus menerus dan aktivitas enzim kemudian dapat dikuantifikasi.
Waktu posting: 2025-07-02