Antigen protein rekombinan sering memiliki beberapa epitop yang berbeda, beberapa di antaranya adalah epitop urutan dan beberapa adalah epitop struktural. Antibodi poliklonal yang diperoleh dengan mengimunisasi hewan dengan antigen terdenaturasi adalah campuran antibodi khusus untuk epitop individu dan dapat digunakan secara umum untuk mendeteksi struktur alami atau protein target terdenaturasi. Manfaat samping menggunakan protein terdenaturasi sebagai imunogen adalah bahwa protein terdenaturasi cenderung lebih imunogenik dan dapat merangsang respons imun yang kuat pada hewan.
Sistem ekspresi Escherichia coli biasanya dipilih untuk tujuan antigenik karena ini adalah sistem yang paling mahal dalam hal waktu dan uang. Untuk meningkatkan kemungkinan ekspresi protein target dan kenyamanan pemurnian, kadang -kadang hanya sebagian kecil dari protein target, seperti domain tertentu, diekspresikan.
Struktur protein tiga dimensi
Domain spesifik protein
Jika tujuan persiapan antibodi semata-mata adalah untuk deteksi WB, ekonomis dan cepat untuk menggunakan peptida kecil sintetis sebagai antigen, tetapi ada risiko imunogenisitas yang lemah atau ketidakteraturan karena pemilihan segmen peptida yang tidak tepat. Karena persiapan antibodi membutuhkan waktu yang lama, dua atau tiga segmen peptida yang berbeda sering dipilih untuk menyiapkan antibodi menggunakan antigen polipeptida untuk memastikan tingkat keberhasilan percobaan.
Kemurnian antigen polipeptida untuk imunisasi harus lebih besar dari 80%. Meskipun kemurnian yang lebih tinggi secara teoritis dapat memperoleh antibodi dengan spesifisitas yang lebih baik, dalam praktiknya, hewan selalu menghasilkan sejumlah besar antibodi non-spesifik, sehingga menutupi manfaat kemurnian antigen.
Selain itu, persiapan antibodi dari peptida kecil harus terkait silang dengan antigen pembawa yang sesuai untuk meningkatkan imunogenisitasnya. Dua pembawa antigenik umum adalah KLH dan BSA.
Waktu posting: 2025-07-03