Sebagai instrumen presisi tinggi, HPLC dapat dengan mudah menyebabkan beberapa masalah kecil yang merepotkan jika tidak dioperasikan dengan cara yang benar selama penggunaan. Salah satu masalah yang paling umum adalah masalah kompresi kolom. Cara dengan cepat memecahkan masalah kromatografi yang salah. Sistem HPLC terutama terdiri dari botol reservoir, pompa, injektor, kolom, ruang suhu kolom, detektor dan sistem pemrosesan data. Untuk seluruh sistem, pilar, pompa, dan detektor adalah komponen utama dan lokasi utama yang rentan terhadap masalah.
Kunci untuk tekanan kolom adalah area yang membutuhkan perhatian erat saat menggunakan HPLC. Stabilitas tekanan kolom terkait erat dengan bentuk puncak kromatografi, efisiensi kolom, efisiensi pemisahan dan waktu retensi. Stabilitas tekanan kolom tidak berarti bahwa nilai tekanan stabil pada nilai yang stabil, melainkan bahwa kisaran fluktuasi tekanan adalah antara 345kPa atau 50psi (memungkinkan untuk penggunaan elusi gradien ketika tekanan kolom stabil dan perlahan berubah). Tekanan terlalu tinggi atau terlalu rendah adalah masalah tekanan kolom.
Kegagalan dan solusi HPLC yang paling rentan
1, tekanan tinggi adalah masalah yang paling umum dalam penggunaan HPLC. Ini berarti peningkatan tekanan yang tiba -tiba. Secara umum, ada alasan berikut: (1) Secara umum, ini karena penyumbatan saluran aliran. Pada titik ini, kita harus memeriksanya. A. Pertama, potong saluran masuk pompa vakum. Pada titik ini, tabung mengintip diisi dengan cairan sehingga tabung mengintip lebih kecil dari botol pelarut untuk melihat apakah cairannya menetes sesuka hati. Jika cairan tidak menetes atau menetes perlahan, kepala filter pelarut diblokir. Pengobatan: Rendam dalam asam nitrat 30% selama setengah jam dan bilas dengan air ultrapure. Jika cairan menetes secara acak, kepala filter pelarut normal dan sedang diperiksa; B. Buka katup pembersihan sehingga fase gerak tidak melewati kolom, dan jika tekanan tidak berkurang secara signifikan, kepala putih filter diblokir. Pengobatan: Whitehead yang disaring dihilangkan dan disonikasi dengan 10% isopropanol selama setengah jam. Dengan asumsi bahwa tekanan turun di bawah 100psi, kepala putih yang disaring normal dan sedang diperiksa; C. Lepaskan ujung keluar kolom, jika tekanan tidak berkurang, kolom diblokir. Pengobatan: Jika itu adalah penyumbatan garam penyangga, bilas 95% sampai tekanannya normal. Jika obstruksi disebabkan oleh beberapa bahan yang lebih terawat, aliran yang lebih kuat dari fase gerak saat ini harus digunakan untuk bergegas menuju tekanan normal. Jika tekanan pembersihan jangka panjang tidak berkurang sesuai dengan metode di atas, inlet dan outlet kolom dapat dianggap terhubung ke instrumen sebaliknya, dan kolom dapat dibersihkan dengan fase gerak. Pada saat ini, jika tekanan kolom masih belum berkurang, pelat saringan pintu masuk kolom hanya dapat diganti, tetapi setelah operasi tidak baik, mudah untuk menyebabkan pengurangan efek kolom, jadi cobalah untuk menggunakan lebih sedikit. Untuk masalah sulit, penggantian kolom dapat dipertimbangkan.
(2) Pengaturan laju aliran yang salah: Laju aliran yang benar dapat diatur ulang.
(3) Rasio aliran yang salah: Indeks viskositas proporsi aliran yang berbeda berbeda, dan tekanan sistem yang sesuai dari aliran dengan viskositas yang lebih tinggi juga lebih besar. Jika memungkinkan, pelarut viskositas yang lebih rendah dapat diganti atau disetel ulang dan disiapkan.
(4) Tekanan Sistem Nol Drift: Sesuaikan nol sensor level cairan.
2, tekanan terlalu rendah (1) biasanya disebabkan oleh kebocoran sistem. Apa yang harus dilakukan: Temukan setiap koneksi, terutama antarmuka di kedua ujung kolom, dan kencangkan area kebocoran. Lepaskan tiang dan kencangkan atau garis film PTFE dengan kekuatan yang sesuai.
(2) Gas memasuki pompa, tetapi tekanan biasanya tidak stabil pada saat ini, tinggi dan rendah. Lebih serius, pompa tidak akan dapat menyerap cairan. Metode Perawatan: Buka katup pembersih dan bersihkan pada laju aliran 3 ~ 5ml/menit. Jika tidak, gelembung udara disedot pada katup buang menggunakan tabung jarum khusus.
(3) Tidak ada aliran keluar fase gerak: Periksa apakah ada fase gerak dalam botol reservoir, apakah wastafel terbenam dalam fase gerak, dan apakah pompa sedang berjalan.
(4) Katup referensi tidak ditutup: katup referensi ditutup setelah perlambatan. Biasanya turun ke 0,1. ~ 0,2ml/ menit setelah menutup katup referensi.
Ringkasan:
Dalam makalah ini, hanya masalah umum dalam kromatografi cair yang dianalisis. Tentu saja, dalam aplikasi praktis kami, kami akan menghadapi lebih banyak masalah lain. Dalam penanganan kesalahan, kita harus mengikuti prinsip -prinsip berikut: hanya mengubah satu faktor pada satu waktu untuk menentukan hubungan antara faktor hipotetis dan masalah; Secara umum, ketika mengganti suku cadang untuk pemecahan masalah, kita harus memperhatikan menempatkan bagian utuh yang dibongkar di tempat untuk mencegah limbah; Membentuk kebiasaan catatan yang baik adalah kunci keberhasilan penanganan kesalahan. Sebagai kesimpulan, saat menggunakan HPLC, penting untuk memperhatikan pretreatment sampel dan operasi serta pemeliharaan peralatan yang tepat.
Waktu posting: 2025-07-02