Prinsip Kerja dan Pembuatan Substrat Reagen Limulus Tripeptida/Endotoksin

Tripeptida reagen Limulus adalah zat tripeptida dengan urutan spesifik yang diekstraksi dari lisat sel darah kepiting tapal kuda atau disintesis secara artifisial. Tripeptida reagen Limulus adalah substrat kromogenik yang digunakan untuk analisis kuantitatif (seperti uji endotoksin bakteri) untuk mendeteksi dan mengukur komponen bakteri Gram-negatif.—endotoksin. Ketika enzim yang diaktifkan oleh endotoksin bekerja, senyawa berwarna (seperti p-nitroanilin) ​​dilepaskan, sehingga intensitas warna dapat diukur dan dikorelasikan dengan kandungan endotoksin.

Prinsip Kerja

Aktivasi Endotoksin: Dengan adanya endotoksin, amebosit dalam darah kepiting tapal kuda melepaskan enzim, sehingga memicu kaskade koagulasi.

Aksi Enzim: Enzim yang diaktifkan (biasanya enzim pembekuan) kemudian bekerja pada substrat kromogenik.

Reaksi Kromogenik: Enzim membelah substrat, melepaskan senyawa kuning yang disebut p-nitroaniline (pNA).

Analisis Kuantitatif: Intensitas warna kuning sebanding dengan kandungan endotoksin dalam sampel dan biasanya diukur menggunakan spektrofotometer pada serapan 405 nm.

Metode Persiapan

Tripeptida reagen Limulus dapat diperoleh melalui dua pendekatan dalam hal persiapan.

1. Mengekstraksi komponen alami dari sel darah Limulus dan memperoleh tripeptida aktif melalui pemisahan dan pemurnian.

2. Menggunakan teknologi sintesis fase padat untuk menghubungkan rangkaian asam amino tertentu secara berurutan, secara tepat mengontrol struktur tripeptida.

Karena kebijakan konservasi Limulus (provinsi seperti Zhejiang, Fujian, Guangdong, dan Guangxi mencantumkannya sebagai "satwa liar perairan utama yang dilindungi" / Hong Kong mengeluarkan peraturan pada akhir tahun 2012 yang melarang penggunaan pukat dasar), dan karena proses ekstraksi yang rumit dan menantang, biaya metode pertama relatif tinggi. Oleh karena itu, sintesis fase padat sekarang umum digunakan. Dengan menghubungkan urutan asam amino tertentu secara berurutan, struktur tripeptida dapat dikontrol secara tepat. Metode ini tidak hanya menjamin stabilitas dan konsistensi produk tetapi juga memungkinkan produksi skala besar, memenuhi kebutuhan industri farmasi akan reagen pengujian.