Latar belakang
Melanotan I, juga dikenal sebagai Afamelanotide, adalah polipeptida linier yang terdiri dari 13 asam amino yang siap memainkan peran yang semakin penting dalam penelitian farmasi. Nama bahasa Inggris utama untuk Melanotan I adalah Melanotan-1 dan Afamelanotide. Sebagai analog sintetik dari hormon perangsang α-melanosit α-MSH), Melanotan I dapat digunakan untuk mengobati gangguan fotosensitifitas yang disebabkan oleh protoporfiria eritropoietik. Saat ini, sebagian besar produk Melanotan I diberi label hanya untuk keperluan penelitian dan belum ditujukan untuk digunakan pada manusia. Dalam sintesis fase padat tradisional, pemilihan resin secara signifikan berdampak pada efisiensi penggabungan dan kemurnian akhir produk.
Informasi dasar
Nama Cina: Melanotan 1
Nama Inggris: Melanotan-1
Nomor Perusahaan: GT-A006
Nomor CAS: 75921-69-6
Urutan: SYS{Ne}EH{D-Phe}RWGKPV-NH2
Rumus Molekul: C78H111N21O19
Berat Molekul: 1646,88
Metode persiapan
SAYA. Persiapan Resin Fmoc-Val-Amino
Langkah 1:Timbang 11,11g (5mmol) resin Ramage Amide AM dengan derajat substitusi 0,45mmol/g dan tambahkan ke dalam reaktor fase padat. Tambahkan DCM untuk menggembungkan resin selama 30 menit, lalu tiriskan. Cuci tiga kali dengan DMF. Tambahkan larutan DMF yang mengandung 20% piperidin (v/v) dan bereaksi selama 5 menit. Tambahkan lagi larutan DMF piperidin 20% dan bereaksi selama 10 menit, dengan satu kali pencucian DMF di antaranya. Setelah reaksi selesai, tiriskan dan cuci tiga kali dengan DMF.
Langkah 2:Larutkan 5,09g Fmoc-Val-OH, 2,02g HOBT (1-hydroxybenzotriazole), dan 2,32ml DIC (N,N'-diisopropylcarbodiimide) dalam DMF pada 0°C. Setelah larut sempurna, tambahkan campuran ke kolom reaksi dan bereaksi pada suhu kamar selama 1 jam. Pantau kemajuan reaksi menggunakan uji ninhidrin, pastikan hasilnya negatif. Setelah reaksi selesai, cuci tiga kali dengan DMF untuk mendapatkan resin Fmoc-Val-amino.
II. Pembuatan Resin Peptida Melanotan I yang Terlindungi Sepenuhnya.
Langkah 1:Tambahkan 20% piperidin dalam larutan DMF (rasio volume) ke Fmoc-Val-aminoresin di atas. Bereaksi selama 5 menit, kemudian tambahkan lagi sebagian piperidin 20% dalam larutan DMF dan bereaksi selama 10 menit. Cuci sekali dengan DMF selama interval. Setelah reaksi selesai, keringkan dalam vakum dan cuci tiga kali dengan DMF.
Langkah 2:Larutkan 5,06g Fmoc-Pro-OH, 2,02g HOBT (1-hydroxybenzotriazole), dan 2,32ml DIC (N,N'-diisopropylcarbodiimide) dalam DMF pada 0°C. Setelah larut sempurna, tambahkan campuran ke kolom reaksi dan bereaksi pada suhu kamar selama 1 jam. Pantau perkembangan reaksi menggunakan uji ninhidrin (uji Kaiser) hingga diperoleh hasil negatif. Setelah selesai, cuci tiga kali dengan DMF untuk mendapatkan Fmoc-Pro-Val-aminoresin.
Langkah 3:Mengikuti metode yang dijelaskan pada Langkah 2, pasangkan setiap asam amino secara berurutan sesuai dengan urutan Melanotan I. Setelah reaksi penggandengan Ac-Ser(tBu)-OH selesai, cuci tiga kali dengan DMF, tiga kali dengan DCM (diklorometana), dan tiga kali dengan metanol. Keringkan dalam kondisi vakum untuk mendapatkan 23,89g peptida terikat resin Melanotan I yang terlindungi sepenuhnya.
AKU AKU AKU. Persiapan Peptida Mentah Melanotan I
23,89 g peptida terikat resin Melanotan I yang terlindungi sepenuhnya ditempatkan dalam labu alas bulat. Pada 0°C, 250 ml koktail belahan dada yang telah disiapkan sebelumnya (terdiri dari TFA:thioanisole:phenol:triisopropylsilane:water = 82.5:7.5:5:3:2 berdasarkan volume) ditambahkan perlahan sambil diaduk. Campuran direaksikan pada suhu rendah selama 0,5 jam, dilanjutkan dengan reaksi pada suhu kamar selama 2 jam. Solusi pembelahan kemudian disaring di bawah vakum. Larutan ini perlahan-lahan ditambahkan ke 2 L dietil eter anhidrat dingin sambil diaduk. Peptida mentah diisolasi dengan penyaringan, dicuci tiga kali dengan dietil eter dingin, dan diperoleh 8,55 g peptida mentah Melanotan I.
IV. Pembuatan Peptida Murni Melanotan I
Langkah 1:Larutkan peptida Melanotan I mentah dalam 100 ml air murni dan saring melalui membran 0,45 μm untuk mendapatkan larutan peptida kasar.
Langkah 2:Purifikasi peptida Melanotan I mentah menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (HPLC). Gunakan kolom kompresi aksial dinamis DAC-HB50 dengan fase gerak A (larutan berair asam trifluoroasetat 0,05%) dan fase gerak B (asam trifluoroasetat 0,05% dalam asetonitril). Lakukan elusi gradien untuk pemisahan dan pemurnian. Deteksi sampel menggunakan detektor UV dan kumpulkan larutan peptida yang sesuai dengan puncak target dalam pecahan.
Langkah 3:Setelah pemurnian HPLC, diperoleh 180 ml larutan Melanotan I trifluoroacetate dengan kemurnian melebihi 99%. Konsentrasikan larutan hingga 50 ml melalui evaporasi putar.
Langkah 4:Setarakan kolom kromatografi dengan air deionisasi dan masukkan 50 ml larutan Melanotan I trifluoroacetate yang telah dimurnikan (kemurnian >99%). Elusi selama 50 menit dalam sistem larutan asam asetat 2%. Konsentrasikan produk target yang dikumpulkan menjadi 80 ml melalui evaporasi putar. Lakukan pengeringan pra-beku dan pengeringan beku hingga diperoleh 5,33 g peptida murni Melanotan I, dengan rendemen 32,33%.
Waktu posting: 05-01-2026