Tinjauan Ekspresi Protein

Protinekspresi mengacu pada teknologi mereproduksi gen target menjadi vektor buatan dan kemudian memasukkannya ke dalam sel penerima atau sistem bebas sel untuk mengekspresikan protein dalam sistem heterolog.

Ekspresi protein dapat menyelesaikan masalah bahwa protein asli sulit diperoleh. Sejak pembentukan ekspresi protein heterolog pertama pada tahun 1970 -an, ribuan protein rekombinan telah berhasil diekspresikan, yang secara efektif mempromosikan pengembangan berkelanjutan bioteknologi dan penelitian dan industri biomedis.

Tujuan:

Melalui ekspresi protein, pertama -tama dimungkinkan untuk mendapatkan protein yang sulit diperoleh dari sumber alami.

Kedua, batch besar dan kemurnian produk ekspresi protein yang tinggi tidak hanya memfasilitasi analisis protein target, tetapi juga sangat mengurangi biaya.

Lebih penting lagi, protein rekombinan biasanya dipilih untuk menunjukkan biosafety yang tinggi dari sel inang, sehingga menghindari beberapa risiko biosafety potensial dari inang patogen.

Metode:

Ini terutama mencakup proses replikasi fragmen gen, pengantar ke dalam sistem ekspresi, ekspresi yang diinduksi, pemurnian dan analisis produk.

Tinjauan Ekspresi Protein

Klasifikasi:

Sistem ekspresi protein umumnya dapat dibagi menjadi:

1. Sistem Ekspresi Nuklir: Escherichia coli adalah sistem ekspresi protein yang paling umum, yang memiliki keunggulan latar belakang genetik yang jelas, reproduksi yang nyaman, biaya rendah dan ekspresi tinggi. Namun, tidak memiliki mekanisme modifikasi terjemahan dan tidak cocok untuk glikosilasi atau pembelahan titik seleksi khusus untuk memodifikasi ekspresi protein. Bacillus subtilis juga dapat digunakan untuk ekspresi protein, dan keunggulannya adalah kemampuan ekspresi metabolisme yang kuat dan aktivitas protease rendah, yang secara bertahap menarik perhatian.

2. Sistem Ekspresi Eukariotik: Tingkat glikosilasi tertentu dapat dicapai setelah terjemahan, yang lebih dekat dengan aktivitas alami protein eukariotik. Itu terutama disertakan. ① Sistem ekspresi ragi (ragi merah umum, ragi pembuatan ragi, dll.), Ragi dapat mellow dengan kepadatan tinggi, dapat dimodifikasi setelah terjemahan, memiliki kelebihan sel inang prokariotik dan eukariotik, dan juga sistem ekspresi protein yang baik. System Sistem Ekspresi Sel Serangga: Gen eksogen ditransfeksi ke sel serangga oleh vektor baculovirus untuk ekspresi. Ini adalah sistem ekspresi tinggi untuk protein eukariotik, yang cocok untuk protein membran, protein makromolekul, protein kinase dan protein lain yang sulit diekspresikan dalam sistem prokariotik. ③ Sistem Ekspresi Sel Mamalia: Efisiensi terjemahan dan dekorasi sel mamalia jauh lebih tinggi daripada sistem sel ragi dan serangga. Struktur dan fungsi sel mamalia lebih dekat dengan protein eukariotik asli, tetapi tingkat ekspresi rendah dan biayanya tinggi.

3. Sistem Ekspresi Bebas Sel: Protein target dapat diekspresikan langsung dari partikel dan produk PCR, dan sistem ekspresi adalah ekstrak bebas sel dari Escherichia coli, embrio gandum, retikulosit kelinci, dll. Keuntungan dari ekspresi protein bebas sel adalah kemampuan untuk mengekspresikan produk yang sulit diekspresikan dalam sistem lain, throughput tinggi, dan otomatisasi, tetapi biaya rendah.