Beberapa pertanyaan dan jawaban tentang kelarutan peptida yang dimodifikasi

1. Kotoran apa yang ada di yang dimurnikan non-HPLC?

A: Peptida yang dimodifikasi dan pengotor peptida yang tidak dimodifikasi dalam peptida yang dimodifikasi mentah dan desalted: seperti peptida yang dimodifikasi non-full-length dan beberapa bahan baku seperti DTT, TFA, dll.

2. Kotoran apa yang dimurnikan oleh HPLC?

A: Peptida yang dimodifikasi yang dimurnikan oleh HPLC masih akan memiliki banyak kotoran, dan kotoran biasanya peptida pendek dan sedikit TFA.

3. Berapa lama itu cocok?

A: Sintesis peptida yang dimodifikasi harus mempertimbangkan panjang peptida yang dimodifikasi, muatan, hidrofilisitas dan hidrofobisitas dan faktor -faktor lainnya. Semakin lama total panjang, semakin rendah kemurnian dan hasil produk mentah, dan semakin tinggi kesulitan pemurnian dan probabilitas kesulitan dalam sintesis. Namun, tidak ada cara untuk mengubah urutan domain fungsional peptida yang dimodifikasi, tetapi untuk menyelesaikan sintesis peptida yang dimodifikasi, kadang -kadang hanya beberapa asam amino tambahan yang dapat ditambahkan dalam hulu dan hilir domain fungsional untuk meningkatkan kelarutan dan hidrofobisitas peptida yang dimodifikasi. Jika peptida yang dimodifikasi terlalu pendek, mungkin ada masalah dalam sintesis. Masalah pertama adalah bahwa peptida yang dimodifikasi yang disintesis memiliki kesulitan tertentu dalam proses pasca pemrosesan. Peptida yang dimodifikasi dalam 5 peptida biasanya memiliki asam amino hidrofobik, jika tidak pasca pemrosesan sulit. Peptida yang dimodifikasi di bawah 15 residu asam amino umumnya dapat diperoleh dengan hasil dan hasil yang memuaskan.

Beberapa pertanyaan dan jawaban tentang kelarutan peptida yang dimodifikasi

4. Bagaimana menilai kelarutan peptida yang dimodifikasi dari urutan?

(1) Peptida yang dimodifikasi yang mengandung proporsi tinggi asam amino hidrofobik seperti Leu, Val, IIE, Met, Phe dan TRP tidak mudah larut dalam larutan berair atau hampir tidak larut. Asam amino ini dapat bermasalah baik dalam pemurnian atau sintesis.

(2) the proportion of hydrophobic amino acids under normal conditions < The proportion of charged amino acids can reach up to 20%. If the N or C of the modified peptide is short, the increase of polar amino acids can also improve the solubility.

5. Mengapa sulit untuk mensintesis Cys, Met, atau TRP?

A: Peptida yang dimodifikasi yang mengandung Cys, Met, atau TRP tidak dapat disintesis, dan produk kemurnian tinggi sulit diperoleh. Ini terutama karena fakta bahwa kelompok -kelompok ini kurang stabil dan rentan terhadap oksidasi. Penggunaan dan penyimpanan peptida yang dimodifikasi ini membutuhkan perawatan khusus untuk mencegah pembukaan tutupnya yang berulang.

6, Mengapa beberapa hasil atau kemurnian sintetis akan sangat rendah?

A: Ada perbedaan yang cukup besar antara sintesis peptida yang dimodifikasi dan sintesis primer. Ada sangat sedikit primer yang tidak dapat disintesis, tetapi sering ada peptida yang dimodifikasi yang tidak dapat disintesis. Seperti Val, Ile, Tyr dan TRP, Leu, Phe, GLN, dan Asam Amino dekat atau loop, peptida yang dimodifikasi tidak dapat meregangkan tubuh dalam proses sintesis, efisiensi sintetis lebih rendah. Efisiensi sintesis dan kemurnian produk sangat rendah dalam kasus-kasus berikut, seperti: Ulangi Pro, Ser-Ser, Ulangi ASP, empat Gly berturut-turut, dll.

7. Bagaimana cara dimurnikan?

A: Peptida yang dimodifikasi umumnya dimurnikan dengan kolom fase terbalik (seperti C8, C18, dll.) Pada 214nm. Sistem buffer umumnya merupakan solusi yang mengandung TFA, Ph2.0. Buffera mengandung 0,1%TFAINDDH2O, dan buffer mengandung 1%TFA/ACN/Ph2.0. Itu dibubarkan di Buffera sebelum pemurnian; Jika solusinya tidak memuaskan, larut dengan buffer, maka encerkan dengan Buffera; Untuk peptida yang dimodifikasi sangat hidrofobik, kadang -kadang sedikit asam formicacid atau asetat ditambahkan.