Antigen protein rekombinan seringkali mempunyai beberapa epitop yang berbeda, beberapa di antaranya merupakan epitop urutan dan beberapa lagi merupakan epitop struktural.Antibodi poliklonal yang diperoleh dengan mengimunisasi hewan dengan antigen terdenaturasi merupakan campuran antibodi spesifik terhadap epitop individu dan dapat digunakan secara umum untuk mendeteksi struktur alami atau protein target yang terdenaturasi.Keuntungan sampingan dari penggunaan protein terdenaturasi sebagai imunogen adalah bahwa protein terdenaturasi cenderung lebih imunogenik dan dapat menstimulasi respon imun yang kuat pada hewan.
Sistem ekspresi Escherichia coli biasanya dipilih untuk tujuan antigenik karena merupakan sistem yang paling mahal dalam hal waktu dan uang.Untuk meningkatkan kemungkinan ekspresi protein target dan kemudahan pemurnian, terkadang hanya sebagian kecil dari protein target, seperti domain tertentu, yang diekspresikan.
Struktur tiga dimensi protein
Domain Spesifik Protein
Jika tujuan persiapan antibodi semata-mata untuk deteksi wb, penggunaan peptida kecil sintetik sebagai antigen akan ekonomis dan cepat, namun terdapat risiko imunogenisitas yang lemah atau non-regenisitas akibat pemilihan segmen peptida yang tidak tepat.Karena persiapan antibodi memerlukan waktu yang lama, dua atau tiga segmen peptida berbeda sering kali dipilih untuk menyiapkan antibodi menggunakan antigen polipeptida guna memastikan tingkat keberhasilan percobaan.
Kemurnian antigen polipeptida untuk imunisasi harus lebih dari 80%.Meskipun kemurnian yang lebih tinggi secara teoritis dapat memperoleh antibodi dengan spesifisitas yang lebih baik, dalam praktiknya, hewan selalu menghasilkan antibodi non-spesifik dalam jumlah besar, sehingga menutupi manfaat kemurnian antigen.
Selain itu, pembuatan antibodi dari peptida kecil harus dihubungkan secara silang dengan antigen pembawa yang sesuai untuk meningkatkan imunogenisitasnya.Dua pembawa antigenik yang umum adalah KLH dan BSA.
Waktu posting: 23 Maret 2023