Sebagai instrumen berpresisi tinggi, HPLC dapat dengan mudah menimbulkan beberapa masalah kecil yang mengganggu jika tidak dioperasikan dengan cara yang benar saat digunakan.Salah satu masalah yang paling umum adalah masalah kompresi kolom.Cara cepat mengatasi masalah kromatografi yang rusak.Sistem HPLC terutama terdiri dari botol reservoir, pompa, injektor, kolom, ruang suhu kolom, detektor dan sistem pemrosesan data.Untuk keseluruhan sistem, pilar, pompa dan detektor merupakan komponen kunci dan lokasi utama yang rawan terhadap masalah.
Kunci dari tekanan kolom adalah area yang perlu diperhatikan saat menggunakan HPLC.Stabilitas tekanan kolom berkaitan erat dengan bentuk puncak kromatografi, efisiensi kolom, efisiensi pemisahan dan waktu retensi.Stabilitas tekanan kolom bukan berarti nilai tekanan stabil pada nilai stabil, melainkan kisaran fluktuasi tekanan antara 345kPa atau 50PSI (memungkinkan penggunaan elusi gradien ketika tekanan kolom stabil dan berubah perlahan).Tekanan yang terlalu tinggi atau terlalu rendah merupakan masalah tekanan kolom.
Yang paling rentan terhadap kegagalan dan solusi HPLC
1, tekanan tinggi adalah masalah paling umum dalam penggunaan HPLC.Ini berarti peningkatan tekanan secara tiba-tiba.Secara umum penyebabnya adalah sebagai berikut: (1) Secara umum hal ini disebabkan adanya penyumbatan saluran aliran.Pada titik ini, kita harus memeriksanya sedikit demi sedikit.A.Pertama, potong saluran masuk pompa vakum.Pada saat ini tabung PEEK telah diisi dengan cairan sehingga tabung PEEK lebih kecil dari botol pelarut untuk melihat apakah cairan tersebut menetes sesuka hati.Jika cairan tidak menetes atau menetes perlahan, kepala filter pelarut tersumbat.Pengobatan: Rendam dalam asam nitrat 30% selama setengah jam dan bilas dengan air ultra murni.Jika cairan menetes secara acak, kepala filter pelarut normal dan sedang diperiksa;B.Buka katup Purge sehingga fase gerak tidak melewati kolom, dan jika tekanan tidak berkurang secara signifikan, white head filter tersumbat.Pengobatan: Komedo putih yang disaring dihilangkan dan disonikasi dengan isopropanol 10% selama setengah jam.Dengan asumsi tekanan turun di bawah 100PSI, white head yang difilter adalah normal dan sedang diperiksa;C.Lepaskan ujung keluar kolom, jika tekanan tidak berkurang maka kolom tersumbat.Pengobatan: Jika penyumbatan garam penyangga, bilas 95% sampai tekanan normal.Jika obstruksi disebabkan oleh material yang lebih awet, aliran yang lebih kuat dari fase gerak yang ada harus digunakan untuk mengalir menuju tekanan normal.Jika tekanan pembersihan jangka panjang tidak berkurang sesuai dengan metode di atas, saluran masuk dan saluran keluar kolom dapat dianggap terhubung ke instrumen sebaliknya, dan kolom dapat dibersihkan dengan fase gerak.Pada saat ini, jika tekanan kolom masih belum berkurang, pelat saringan masuk kolom hanya dapat diganti, tetapi jika pengoperasiannya tidak baik, efek kolom akan mudah berkurang, jadi coba gunakan lebih sedikit.Untuk soal yang sulit, penggantian kolom dapat dipertimbangkan.
(2) Pengaturan laju aliran salah: Laju aliran yang benar dapat diatur ulang.
(3) Rasio aliran salah: indeks viskositas dari proporsi aliran yang berbeda berbeda, dan tekanan sistem yang sesuai dari aliran dengan viskositas lebih tinggi juga lebih besar.Jika memungkinkan, pelarut dengan viskositas lebih rendah dapat diganti atau diatur ulang dan disiapkan.
(4) Penyimpangan nol tekanan sistem: sesuaikan nol sensor level cairan.
2, tekanan terlalu rendah (1) biasanya disebabkan oleh kebocoran sistem.Apa yang harus dilakukan: Temukan setiap sambungan, terutama antarmuka di kedua ujung kolom, dan kencangkan area kebocoran.Lepaskan tiang dan kencangkan atau lapisi film PTFE dengan kekuatan yang sesuai.
(2) Gas masuk ke pompa, tetapi tekanan biasanya tidak stabil saat ini, tinggi dan rendah.Lebih parah lagi, pompa tidak akan mampu menyerap cairan.Metode perawatan: buka katup pembersih dan bersihkan dengan laju aliran 3~5ml/menit.Jika tidak, gelembung udara disedot pada katup buang menggunakan tabung jarum khusus.
(3) Tidak ada aliran keluar fase gerak: periksa apakah ada fase gerak di dalam botol reservoir, apakah bak cuci terendam dalam fase gerak, dan apakah pompa sedang bekerja.
(4) Katup acuan tidak tertutup: katup acuan ditutup setelah perlambatan.Biasanya turun menjadi 0,1.~ 0,2mL/menit setelah menutup katup referensi.
Ringkasan:
Dalam makalah ini, hanya permasalahan umum dalam kromatografi cair yang dianalisis.Tentu saja, dalam penerapan praktis kita, kita akan menghadapi lebih banyak masalah lainnya.Dalam penanganan kesalahan, kita harus mengikuti prinsip-prinsip berikut: hanya mengubah satu faktor pada satu waktu untuk menentukan hubungan antara faktor hipotetis dan masalah;Secara umum, saat mengganti suku cadang untuk mengatasi masalah, kita harus memperhatikan untuk mengembalikan suku cadang utuh yang telah dibongkar ke tempatnya untuk mencegah pemborosan;Membentuk kebiasaan mencatat yang baik merupakan kunci keberhasilan penanganan kesalahan.Kesimpulannya, saat menggunakan HPLC, penting untuk memperhatikan perlakuan awal sampel serta pengoperasian dan pemeliharaan peralatan yang benar.
Waktu posting: 18 Sep-2023